Alen Hadžić1, Lučka Boltežar2 Terapija z limfociti T, gensko spremenjenimi s himernimi antigenskimi receptorji (CaR-T) Chimeric Antigen Receptor T-cell (CAR-T) Therapy IZvLEČEK KLJUČNE BESEDE: imunoterapija, adoptivna T-celična terapija, himerni antigenski receptor, CAR-T, B-celični limfom Terapija z limfociti T, gensko spremenjenimi s himernimi antigenskimi receptorji, je pod- vrsta imunoterapije, natančneje adoptivne T-celične terapije, ki se je razvila z namenom tarčnega in specifičnega uničenja rakavih celic. V prispevku predstavljamo pregled struk- ture, delovanja in izdelave CAR-T, trenutne rezultate zdravljenja s CAR-T pri nekaterih hematoloških rakih in solidnih tumorjih, najpogostejše stranske učinke in osnove odpor- nosti na zdravljenje s CAR-T. aBSTRaCT KEY WORDS: immunotherapy, adoptive T-cell therapy, chimeric antigen receptor, CAR-T, B-cell lymphoma Chimeric antigen receptor T-cell (CAR-T) therapy is a subtype of immunotherapy, more specifically adoptive T-cell therapy, which has been developed to target and specifically eliminate cancer cells. In this paper, we review the structure, function and manufacturing of CAR-T, the current use of CAR-T in some haematological malignancies and solid tumours, the most common side-effects of CAR-T, and the basis of resistance to CAR-T therapy. 1 Alen Hadžić, štud. med., Medicinska fakulteta, Univerza v Ljubljani, Vrazov trg 2, 1000 Ljubljana; alenhadzic03@gmail.com 2 Doc. dr. Lučka Boltežar, dr. med, Oddelek za zdravljenje limfomov, Onkološki inštitut Ljubljana, Zaloška cesta 2, 1000 Ljubljana; Katedra za onkologijo, Medicinska fakulteta, Univerza v Ljubljani, Vrazov trg 2, 1000 Ljubljana 387Med Razgl. 2023; 62 (3): 387–400 • doi: 10.61300/mr6203014 • Pregledni članek mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 387 UvOD Ena  izmed  poglavitnih  lastnosti  rakavih celic  je pobeg  imunskemu odzivu. Preko avtokrinega kot tudi parakrinega delovanja z  izločanjem  citokinov  si  namreč  rakave celice  preoblikujejo mikrookolje  in  spre- menijo lastno znotrajcelično signalizacijo, kar jim omogoča ugodne pogoje za proli- feracijo, neovirano s strani imunskega siste- ma. To je vodilo v intenziven razvoj imu- noterapije, katere cilj je ponovno vzpostaviti normalen  imunski  odziv  proti  rakavim celicam  (1).  Kot  učinkovita  se  je  kmalu izkazala imunoterapija z zaviralci imunskih kontrolnih točk, s katero spodbujamo akti- vacijo in citotoksično delovanje limfocitov T (2). Ta pa ima tudi svoje ovire, saj je pogo- sto v imunski pobeg vključena tudi okrnjena prepoznava antigenov na površini rakavih celic (1, 3). V ta namen se je razvila podvr- sta imunoterapije, ki jo imenujemo adop- tivna T-celična terapija. Temelji na gensko spremenjenih  limfocitih  T,  ki  so  ciljano usmerjeni  v  imunski  odziv  proti  točno določenemu  antigenu  (4).  Razvoj  takšne terapije je omogočilo gensko inženirstvo, s katerim spodbudimo sintezo in izražanje himernega antigenskega receptorja (angl. chimeric antigen receptor, CAR) na površini limfocitov T. Takšnim limfocitom pravimo limfociti T, gensko spremenjeni s himer- nimi antigenskimi receptorji (angl. chime- ric antigen receptor T cells, CAR-T), in pred- stavljajo osnovo za razvoj zdravljenja raka s terapijo CAR-T. HIMERNI aNTIGENSKI RECEPTORJI Struktura himernih antigenskih receptorjev CAR so rekombinantni antigenski receptorji, ki vsebujejo hkrati antigen vezočo dome- no in limfocit T aktivirajočo domeno, zara- di česar jih imenujemo himerni receptorji. Lahko jih umetno sintetiziramo in določa- mo njihovo specifičnost. S poznavanjem za posamezne rakave celice specifičnih anti- genov lahko sintetiziramo CAR, namenjene 388 Alen Hadžić, Lučka Boltežar Terapija z limfociti T, gensko spremenjenimi s himernimi antigenskimi … tarčnemu prepoznavanju izbranih celic (5). Sestavljen je iz treh glavnih podenot: anti- gen  vezavnega mesta,  transmembranske domene in znotrajcelične domene (slika 1) (4–7). Antigen vezavno mesto tvori enoverižni variabilni fragment (angl. single chain varia- ble fragment, scFV), ki je sestavljen iz varia- bilnih  fragmentov  težke  in  lahke  verige monoklonskih protiteles (angl. variable light, VL;  variable heavy,  VH). Antigen  vezavno mesto je tisto, ki določi specifičnost in afi- niteto receptorja za posamezen epitop anti- gena in je ključno pri sintezi CAR. S spre- minjanjem afinitete scFV do epitopa lahko pomembno vplivamo na funkcijo in doga- janje s CAR-T, saj vezava z različno afiniteto vodi do različnih znotrajceličnih odzivov CAR-T, poleg tega pa je od strukture scFV odvisna stabilnost CAR na površini CAR-T (5, 7, 8). Antigen vezavno mesto je s tran- smembransko domeno povezano preko t. i. razvejitvenega mesta  (angl. hinge region) (slika 1). Z uporabo različno dolgih razve- jitvenih  mest  uravnavamo  fleksibilnost antigen vezavno mesto transmembranska domena znotrajcelična domena scFV VL fragment V fragment H razvejitveno mesto Slika 1. Struktura himernega antigenskega receptorja. scFV – enoverižni variabilni fragment (angl. single chain variable fragment), VH – variabilni fragment težke verige monoklonskih protiteles (angl. variable heavy), VL – variabilni fragment lahke verige mono- klonskih protiteles (angl. variable light). mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 388 antigen vezavnega mesta CAR,  s  tem pa vplivamo na dostop do antigena, kar ima lahko pomembne in vivo posledice (8–10). Transmembranska domena služi predvsem sidranju CAR v membrano limfocita T, zato izbira strukturno različnih transmembran- skih  domen  biološko  najmanj  vpliva  na funkcijo CAR-T. Znotrajcelična domena je odgovorna  za  prenos  signala  po  vezavi antigena na CAR, torej za efektorsko funk- cijo CAR-T. V uporabi so CAR-T različnih generacij, ki se razlikujejo v zgradbi zno- trajcelične domene. CAR prve generacije uporabljajo za zno- trajcelično signalizacijo CD3-ζ (zeta) (slika2). Gre za podenoto kompleksa CD3, ki je v lim- focitih T odgovoren za prenos signala po vezavi antigena na T-celični receptor (TCR) (5, 6, 8, 11, 12). Za najbolj učinkovito delo- vanje limfocitov T oz. CAR-T pa se je izka- zala  še  uporaba  dodatne  signalizacije z dodatno podenoto znotrajcelične domene. Na ta način lahko z dodatnim odzivom spod- budimo CAR-T k tvorbi vnetnih citokinov, zmanjšamo tonično signalizacijo (signali- zacija brez vezave antigena), spodbudimo klonsko  ekspanzijo  ob  aktivaciji  (interlev- kin-2 (IL-2), glavni rastni dejavnik za lim- focite T) in podaljšamo čas delovanja CAR-T (čas do disfunkcije limfocita T). CAR druge generacije vsebujejo poleg CD3-ζ na znotrajcelični domeni še kosti- mulatorno podenoto; bodisi CD28 bodisi 4-1BB, CAR tretje generacije pa vsebujejo obe omenjeni podenoti (slika 2). Dodajanje četrte (CAR četrte generacije) oz. prilaga- janje obstoječih kostimulatornih podenot in njihov  vpliv  na  učinkovitost  in  stranske učinke zdravljenja s CAR-T je tema mnogih raziskav (6–8, 13). Delovanje himernih antigenskih receptorjev CAR imajo pri CAR-T podobno funkcijo kot TCR  na  nespremenjenih  limfocitih  T.  Ob vezavi na antigen sprožijo kaskado znotraj- celičnih reakcij, ki je odgovorna za efektor- sko funkcijo limfocitov T oz. CAR-T (slika 3) (6). Ima pa prepoznava antigena s CAR kar nekaj prednosti pred klasično prepoznavo s TCR. Je namreč neodvisna od predstavitve antigena na površini rakavih celic s kom- pleksom  tkivne  skladnosti 1  (angl. major histocompatibility complex-1,  MHC-I),  kar 389Med Razgl. 2023; 62 (3): CAR prve generacije CAR druge generacije CAR tretje generacije CD28CD28 ali 4–1BB CD3–ζ CD3–ζ CD3–ζ 4–1BB Slika 2. Različne generacije himernih antigenskih receptorjev. CAR – himerni antigenski receptor (angl. chimeric antigen receptor), CD – membranski označevalec pripadnosti (angl. cluster of differentiation). mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 389 predstavlja eno ključnih prednosti terapi- je CAR-T, saj s prilagajanjem limfocitov T tako združimo komponente prirojenega in pridobljenega imunskega odziva (osnovna lastnost prirojenega imunskega odziva je od MHC-I neodvisen imunski odziv, medtem ko je glavna pridobitev pridobljenega imun- skega odziva specifičen imunski odziv proti točno določenemu antigenu). Poleg tega je spekter strukturno različnih epitopov (anti- genov), ki jih lahko CAR prepozna, širši od spektra epitopov TCR. Tako lahko CAR-T tar- čno usmerimo proti antigenom na površi- ni rakavih celic, ki jih limfociti T ne bi mogli prepoznati. Tudi disfunkcija limfocita zara- di dolgotrajne aktivacije z antigenom nasto- pi pri CAR-T kasneje kot pri nespremenjenih limfocitih T (6, 7, 14, 15). Postopek priprave terapije CaR-T CAR-T sintetiziramo iz bolnikovih lastnih celic. Iz krvi izoliramo levkocite, nato pa med  njimi  izoliramo  limfocite  T  in  jih v nadzorovanem okolju (citokini, aktiva- torji in koaktivatorji) v kulturi gojimo do zrelosti. Sintezo CAR spodbudimo z vno- som gena za CAR v DNA limfocitov T. V ta namen uporabljamo predvsem retroviru- sne in  lentivirusne sisteme vektorskega vnosa, redkeje nevirusne sisteme, v razi- skavah pa proučujejo tudi možnosti upo- rabe različnih vrst neposrednega genom- skega  urejanja.  Ko  limfociti  T  začnejo sintetizirati in izražati CAR, jih namnoži- mo in pripravimo za uporabo. Pred upo- rabo CAR-T mora bolnik večinoma preje- ti  še  limfodeplecijsko  kemoterapijo,  saj z zmanjšanjem obstoječih limfocitov povi- šamo  možnosti  za  preživetje  vnesenih CAR-T. Terapija CAR-T poteka v enkratnem odmerku  (včasih  je  lahko  razdeljena  na 2–3 dni), v čemer se bistveno razlikuje od drugih oblik sistemskega zdravljenja, pri katerih poteka zdravljenje običajno v ciklih na nekaj tednov (8, 14–17). KLINIČNa UPORaBa CaR-T Klinično se je terapija s CAR-T izkazala za zelo učinkovito pri nekaterih vrstah  lev- kemij in limfomov, prav tako pa potekajo raziskave na več vrstah solidnih tumorjev. V  Sloveniji  je  v  času  pisanja  terapija s  CAR-T v  uporabi  pri  akutni  B-limfo - blastni levkemiji (angl. B-cell acute lymph- oblastic leukaemia,  B-ALL)  in  difuznem velikoceličnem B-celičnem limfomu, upo- raba  v  zdravljenju  hematoloških  rakavih bolezni pa se hitro širi (18–21). V svetu je za klinično uporabo registriranih šest pro- duktov CAR-T: axicaptagene ciloleucel, bre- xucabtagene autoleucel, tisagenlecleucel, lisocabtagene  maraleucel,  idecabtagene vicleucel  in  ciltacabtagene  autoleucel. V Sloveniji je na voljo le Novartisov pre- parat tisagenlecleucel s tovarniškim ime- nom Kymriah®  (18, 22).  Ena pomembnih omejitev  zdravljenja  s  CAR-T  je  visoka cena produkta, kar omejuje njihovo širšo uporabo v številnih državah. 390 Alen Hadžić, Lučka Boltežar Terapija z limfociti T, gensko spremenjenimi s himernimi antigenskimi … rakava celica CAR–T citosol citosol aktivacija CD3–ζ scFV antigen Slika 3. Prepoznava rakave celice s himernim anti- genskim receptorjem. scFV – enoverižni variabilni fragment (angl. single chain variable fragment), CD – membranski označevalec pripadnosti (angl. clu- ster of differentiation), CAR-T – limfocit T, spre- menjen s himernim antigenskim receptorjem (angl. chimeric antigen receptor T cells, CAR-T). mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 390 akutna B-limfoblastna levkemija Pri  B-ALL  kaže  terapija  s  CAR-T  dober odziv na zdravljenje že več kot deset  let. Učinkovitost terapije so dokazali tako pri odrasli kot pediatrični populaciji (18, 23, 24). Leta 2010 so Brentjens in sodelavci v kli- nični raziskavi faze 1 pri bolnikih s pono- vitvami B-ALL uporabili CAR-T, usmerjene proti CD19, ki jo izražajo zreli limfociti B in vsi njihovi predhodniki (25). Leta 2018 so poročali o dolgoročnih izidih omenjene raziskave, v kateri je 53 bolnikov z B-ALL prejelo aplikacijo CAR-T, od tega so popol- ni odgovor na zdravljenje dosegli pri kar 83% vključenih bolnikov (24). V času pisa- nja  je na voljo več podobnih  raziskav,  ki poročajo o dolgoročnih učinkih zdravljenja na  večjih  populacijah  bolnikov  (tj.  čas spremljanja več kot eno leto in vključenih vsaj 20 bolnikov) (tabela 1) (18). V navede- nih raziskavah so vključevali bolnike, ki so imeli ponovitve B-ALL oz. refraktorno B- ALL in so prestali že vsaj dva reda sistem- skega zdravljenja (20). V večini raziskav so popolni  odgovor na  zdravljenje  (popolno remisijo brez minimalne rezidualne bole- zni) dosegli pri 70–80% bolnikov. Srednje preživetje brez bolezni se med raziskavami zelo razlikuje. Vzrok temu je verjetno veli- ka heterogenost skupin vključenih bolnikov (še posebej po starosti), pomembne pa so tudi razlike v prejemanju nadaljevalnega (konsolidacijskega)  zdravljenja – alogene (darovalec  je  ožji  sorodnik)  presaditve 391Med Razgl. 2023; 62 (3): Tabela 1. Uporaba terapije s CAR-T pri bolnikih z akutno B-celično limfoblastno levkemijo (18). EFS – pre- živetje brez dogodka (angl. event-free survival), RFS – preživetje brez ponovitve bolezni (angl. relapse-free survival). Raziskava Populacija Srednji čas Delež bolnikov, Preživetje (leto objave) (število bolnikov) spremljanja pri katerih je dosežen popolni odgovor Shah in sod. pediatrična in mladi 4,8 let 62 % srednje EFS: (2021) (30) odrasli,a odrasli (50) 3,1 meseca Laetsch in sod. pediatrična in mladi 39 mesecev 82 % srednje EFS: (2023) (31) odrasli,a odrasli (79) 24 mesecev Jacoby in sod. pediatrična in mladi 3 leta 86 % srednje EFS: (2022) (32) odrasli,a odrasli (37) 17 mesecev Wayne in sod. pediatrična in mladi 36 mesecev 67 % srednje EFS: (2022) (33) odrasli,a odrasli (24) 5,2 meseca Hay in sod. odrasli (53) 31 mesecev 85 % srednje EFS: (2019) (34) 7,6 meseca Park in sod. odrasli (53) 29 mesecev 83 % srednje EFS: (2018) (24) 6,1 meseca Shah in sod. odrasli (45) 22 mesecev 69 % srednje RFS: (2021) (35) 7 mesecev Roddie in sod. odrasli (20) 22 mesecev 85 % EFS po dveh letih: (2021) (36) 44 % Shah in sod. odrasli (55) 16 mesecev 71 % srednje RFS: (2021) (37) 11,6 meseca Wang in sod. pediatrična in mladi 16 mesecev 83 % EFS po treh letih: (2021) (38) odraslia (24) 37 % Frey in sod. odrasli (35) 13 mesecev 69 % srednje EFS: (2020) (26) 5,6 meseca a Stari do 25 let. mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 391 krvotvornih matičnih celic (angl. haemato- poietic stem cell transplantation,  HSCT). Raziskave se (glede na razlike v načrtu razi- skave) razlikujejo v deležu bolnikov s po- polnim  odgovorom,  ki  so  po  zdravljenju s CAR-T prejeli HSCT (razpon 17–88% bol- nikov), kar pa lahko vpliva na dolgoročne izide preživetja teh bolnikov (18). V večini raziskav je delež bolnikov s ponovitvijo po popolnem odgovoru večji med tistimi, ki po zaključenem zdravljenju niso prejeli nada- ljevalne alogene HSCT (18, 26). Izjema so določene pediatrične populacije, pri kate- rih se kaže, da bi lahko terapija z anti-CD19 CAR-T imela enak učinek tudi brez nada- ljevanja z alogeno HSCT. V prihodnje bo ključnega  pomena  natančnejša  določitev podskupine bolnikov, pri katerih je (oz. pri katerih  ni)  nadaljevalna  alogena  HSCT nujno  potrebna  (27).  Leta  2021  so  v  ta namen Hu in sodelavci opravili metaana- lizo, v katero so vključili 758 bolnikov z  B-ALL,  zdravljenih  s  CAR-T.  Njihovi rezultati kažejo na nižji delež ponovitev in daljše srednje celokupno preživetje ob kom- binaciji CAR-T z alogeno HSCT. Obstajajo pa pomembne razlike glede na raso (slab- ša učinkovitost nadaljevalne HSCT pri bel- cih)  in strukturo izbranih CAR-T – izbira različnih kostimulatornih podenot (28). Te razlike bo treba v prihodnosti še natančneje opredeliti.  Pomembno  je  tudi  opredeliti napovedne dejavnike, ki bi lahko vplivali na ponovitev in celokupno preživetje bolnikov z B-ALL, zdravljenih s CAR-T. Med te tre- nutno uvrščamo predvsem visoko tumor- sko breme v času prejemanja CAR-T oz. tik pred zdravljenjem, prizadetost centralnega živčnega sistema (CŽS), mutacijo v genu za protein p53 TP53 (angl. tumor protein p53, negativni prediktivni dejavniki)  in  izbiro različnih generacij CAR-T (CAR-T tretje in četrte generacije kažejo manjši delež pono- vitev po zdravljenju) (29). Poleg omenjenega sta predmet raziskav še kombiniranje razli- čnih  CAR-T  (tako  kombinacija  različnih generacij kot kombinacija CAR-T, usmer- jenih v različne antigene) in aplikacija dodat- nega (drugega) odmerka CAR-T (29).  V  Sloveniji  se  CAR-T  v  času  pisanja uporablja za zdravljenje pediatrične popu- lacije in mladih odraslih (starih do 25 let) z  B-ALL, ki  je  neodzivna  na  zdravljenje, s ponovitvijo B-ALL po alogeni presaditvi HSCT ali s katero drugo kasnejšo ponovit- vijo bolezni (20). visokomaligni B-celični limfomi Med  visokomaligne  B-celične  limfome glede na  klasifikacijo  Svetovne  zdrav- stvene organizacije uvrščamo več cito- loško in (po novem) tudi genetsko opre- deljenih entitet, med njimi je tudi difuzni velikocelični B-celični limfom (za podro- bno  klasifikacijo  glej  Alaggio  in  sod., 2022) (39). Tako kot pri B-ALL med indi- kacije za zdravljenje s CAR-T sodijo neod- zivna bolezen ali bolezen s ponovitvami. V času pisanja imamo na voljo več razi- skav, ki poročajo o dolgoročnih učinkih zdravljenja s CAR-T pri teh bolnikih (ta- bela  2,  vključene  so  raziskave  s  časom spremljanja  vsaj  dve  leti  in  z  vsaj  20 vključenimi  bolniki)  (18).  Tudi  pri  teh raziskavah so skupine vključenih bolnikov heterogene (starost, vrsta limfoma, stadij bolezni) in so zato izidi pri preživetju zelo različni,  medtem  ko  se  delež  bolnikov s popolnim odgovorom giblje nekje med 50–65%, kar kaže na dobro učinkovitost zdravljenja s CAR-T kot tretjega (ali kas- nejšega) reda zdravljenja pri teh bolnikih. Pomemben je tudi podatek, da je večina raziskav  pokazala,  da  obstaja  tudi  pod- skupina bolnikov oz. en delež bolnikov, ki so bili zdravljeni s CAR-T in pri katerih popolni  odgovor  (remisija)  vztraja  brez nadaljevalnega zdravljenja tudi dve leti po zdravljenju ali celo več (18). Raziskave se razlikujejo tudi po tem, da nekatere pote- kajo brez limfodeplecijske kemoterapije oz. le-ta ni bila dovoljena, medtem ko se v večini raziskav limfodeplecijska kemo- terapija uporablja. 392 Alen Hadžić, Lučka Boltežar Terapija z limfociti T, gensko spremenjenimi s himernimi antigenskimi … mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 392 V Sloveniji v času pisanja s CAR-T zdra- vimo  odrasle  bolnike  s  ponovitvami  ali z  neodzivno  obliko  difuznega  velikoceli- čnega B-celičnega limfoma po dveh ali več redih sistemskega zdravljenja (20). V tujini pa potekajo raziskave s CAR-T v zgodnejših linijah zdravljenja. Plazmocitom Tudi  pri  bolnikih  s  plazmocitomom  se zdravljenje  s  CAR-T  uporablja  pri  tistih s ponovitvami bolezni ali z neodzivno obli- ko bolezni. V primerjavi z B-ALL in viso- komalignimi B-celičnimi limfomi je poda- tkov  o  dolgoročnih  učinkih  zdravljenja manj, tisti, ki so na voljo, pa kažejo na visok delež bolnikov s popolnim odgovorom na zdravljenje (30–80%), pri nekaterih od teh bolnikov pa je opaziti tudi podaljšan popol- ni odgovor na zdravljenje (več kot eno leto brez dodatne terapije). Terapija s CAR-T tako kaže dober potencial za uporabo tudi pri nekaterih bolnikih s plazmocitomom (18, 48). V Sloveniji trenutno tovrstno zdrav- ljenje bolnikov s plazmocitomom še ni na voljo. Solidni tumorji Zaradi visokega terapevtskega potenciala zdravljenja s CAR-T poteka veliko raziskav na področju uporabe CAR-T pri zdravljenju solidnih tumorjev. Težava se pojavi pred- vsem pri opredelitvi označevalcev oz. tarč CAR-T, ki bi bile dovolj specifične za tumorske 393Med Razgl. 2023; 62 (3): Tabela 2. Uporaba terapije s CAR-T pri bolnikih z visokomalignimi B-celičnimi limfomi (18). DLBCL – difuzni velikocelični B-celični limfom (angl. diffuse large B-cell lymphoma), FL – folikularni limfom, PFS – prežive- tje brez napredovanja bolezni (angl. progression free survival), PMBCL – primarni mediastinalni B-celični limfom, tFL – transformiran folikularni limfom, EFS – preživetje brez dogodka (angl. event-free survival), CLL – kronična limfocitna levkemija (angl. chronic lymphocytic leukaemia), SLL – drobnocelični B-limfom (angl. small lymphocytic lymphoma), MCL – limfom plaščnih celic (angl. mantle cell lymphoma), LBCL – velikocelični B-celični limfom (angl. large B-cell lymphoma), HGBCL – visokomaligni B-celični limfom (angl. high-grade B-cell lymphoma). Raziskava Bolezen Srednji čas Delež bolnikov, Preživetje (leto objave) (število bolnikov) spremljanja pri katerih je dosežen popolni odgovor Chong in sod. DLBCL in FL (38) 61 mesecev 55 % DLBCL – 5-letno (2021) (40) PFS 31-%, FL – 5-letno PFS 43-% Jacobson in sod. DLBCL, PMBCL 51 mesecev 54 % srednje EFS: (2021) (41) in tFL (101) 5,7 meseca Cappell in sod. DLBCL/PMBCL, 42 mesecev 58 % srednje EFS: (2020) (42) indolentni limfom, 55 mesecev CLL/SLL (43) Schuster in sod. DLBCL, HGBCL 40 mesecev 39 % srednje EFS: (2021) (43) in tFL (115) 2,8 meseca Hirayama in sod. tFL in FL (21) 38 mesecev (tFL) 46 % (tFL) srednje PFS 1,9 (2019) (44) 24 mesecev (FL) 88 % (FL) meseca Wang in sod. MCL (68) 36 mesecev 68 % srednje PFS 26 (2023) (45) mesecev Abramson in sod. LBCL (270) ni podan (vsi več 53 % srednje PFS 6,8 (2021) (46) kot 24 mesecev) mesecev Locke in sod. DLBCL, HGBCL, 25 mesecev 65 % srednje PFS 15 (2022) (47) drugo (180) mesecev mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 393 celice (kot je to npr. CD19 pri B-celičnih lim- fomih). Ker gre pri tumorjih za heteroge- ne tvorbe, je namreč težko opredeliti dobre tarče,  ki  bi  omogočale  tarčno  delovanje CAR-T brez prekomernih stranskih učinkov zaradi  napada  na  človeku  lastne  nespre- menjene celice (49). Pri zdravljenju B-celi- čnih  limfomov  je  CD19  izražen  tudi  na zdravih  limfocitih  B  in  tako  terapija  ni popolnoma specifična, a lahko (neželene) učinke zdravljenja s CAR-T na zdrave lim- focite B dobro nadziramo (npr. z nadomeš- čanjem protiteles) (50). Naslednja ovira za zdravljenje  solidnih  tumorjev  pa  je  sam vstop limfocitov T (oz. CAR-T) v tumorsko tkivo.  Tumorsko  mikrookolje  je  namreč pogosto spremenjeno v protivnetno, z zmanj- šano proizvodnjo ustreznih adhezijskihmole- kul, kemokimov in citokinov, kar predstavlja 394 Alen Hadžić, Lučka Boltežar Terapija z limfociti T, gensko spremenjenimi s himernimi antigenskimi … težavo vsem oblikam imunoterapije. Trenutni pristopi k reševanju opisanih preprek vklju- čujejo uporabo različnih režimov predpri- prave  bolnika  in  kombiniranje  različnih oblik zdravljenja (4, 49, 51–53). Zaradi  omenjenih  preprek  je  za  zdaj vloga CAR-T v zdravljenju solidnih tumor- jev predvsem v izboljšanju izida zdravlje- nja s kombiniranjem CAR-T z drugimi že obstoječimi  terapijami,  kot  so  klasično obsevanje, kemoterapija in imunoterapija (49, 51, 54). Trenutno poteka več raziskav, ki se ukvarjajo s tovrstno uporabo CAR-T pri zdravljenju bolnikov z glioblastomom, kolorektalnim rakom, rakom trebušne sli- navke,  ledvičnim  rakom  in  rakom  jeter, rakom prostate,  jajčnikov, dojke, mezote- liomom in rakom pljuč. Najbolj aktualne so raziskave na področju rakavih obolenj, pri Glioblastom • EGFR • HER2 , . Nevroblastom • GD2 Mezoteljom • ezotelin • FAP M , . Pljučni rak • irozin kinazni receptor R0R1 • mucin T , . Rak ledvic • irozin kinazni receptor UFOT Rak prostate • PSMA • PSCA , . Gastrointestinalni raki • ezotelin • karcinoembrijski antigen (CEA) • klavdin • PSCA • glipikan • CD133 M , , , , , . Rak jajčnikov ezotelin • HER2, • folatni receptor α. • M , Slika 4. Uporaba CAR-T pri solidnih tumorjih (51, 54). EGFR – receptor za epidermalni rastni dejavnik (angl. epidermal growth factor receptor), HER2 – receptor 2 za humani epidermalni rastni dejavnik (angl. human epidermal growth factor receptor 2), FAP – aktivator fibroblastov (angl. fibroblast activation protein), CEA – karcinoembrionalni antigen (angl. carcino-embryonic antigen), PSCA – antigen matičnih celic prostate (angl. prostate stem cell antigen), CD – membranski označevalec pripadnosti (angl. cluster of differentiation), PSMA – za prostato specifični membranski antigen (angl. prostate specific membrane antigen). mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 394 katerih  sta  s  trenutnimi  pristopi  k  zdra- vljenju odziv na zdravljenje in preživetje slaba. Tarče, ki  se v kliničnih raziskavah uporabljajo pri posameznih solidnih tumor- jih, so povzete na sliki 4. Za podrobnejši opis posameznih raziskav pri solidnih tumorjih glej Mehrabadi in sod. (2022) in Patel in sod. (2022) (51, 54). V Sloveniji CAR-T za zdrav- ljenje solidnih tumorjev še niso na voljo. STRaNSKI UČINKI ZDRavLJENJa S CaR-T Stranske učinke zdravljenja s CAR-T delimo na kratkoročne in dolgoročne. Med kratko- ročne uvrščamo sindrom sproščanja cito- kinov (angl. cytokine release syndrome, CRS) in sindrom z imunskimi efektorskimi celi- cami posredovane nevrotoksičnosti (angl. immune effector cell-associated neurotoxicity, ICANS), ki se pojavita v prvem tednu ali mesecu  po  zdravljenju.  Med  dolgoročne učinke uvrščamo citopenije in hipogama- globulinemijo. Posredno lahko med stran- ske učinke zdravljenja s CAR-T uvrščamo tudi razna vnetja, ki pa so bolj posledica v nadaljevanju opisanih citopenij in hipo- gamaglobulinemije (55). Trenutno so podporni ukrepi pri stran- skih učinkih predvsem simptomatski – za drug pristop bi bilo treba namreč vzposta- viti nekakšno  stikalo,  s  katerim bi  lahko delovanje CAR-T hitro in nadzorovano pre- kinili. Med predlaganimi pristopi so upo- raba spodbujene apoptoze, t. i. samomoril- skih genov (angl. suicide genes) in zaviralnih CAR-T (usmerjenih proti prvotno vnesenim CAR-T). Ker pa gre pri CAR-T za terapijo z živimi celicami, je odziv na zdravljenje težko predvideti in vnaprej določiti prime- ren čas za tovrstno prekinitev zdravljenja (tako kot  je težko deterministično obrav- navati človekov imunski odziv). V teoriji bi bil primeren trenutek za prekinitev delo- vanja ob pojavu življenje ogrožajočih stran- skih učinkov zdravljenja ali pa kasneje, ko je tumor (ali v primeru hematoloških bole- zni rakave celice) v celoti odstranjen (50). Sindrom sproščanja citokinov CRS je eden izmed glavnih stranskih učin- kov zdravljenja s CAR-T, pri katerem gre za prekomeren sistemski vnetni odziv, v eni izmed oblik pa se pravzaprav pojavi pri sko- raj  vseh  bolnikih,  zdravljenih  s  CAR-T. Nastane kot posledica izločanja vnetnih cito- kinov  in kemokinov CAR-T  (internefron γ, tumor nekrotizirajoč faktor, IL-2, IL-8, IL-10) (56). V blagih oblikah se kaže s prehladu podobnimi  simptomi:  povišana  telesna temperatura, bolečine v mišicah in skele- tu, glavobol, utrujenost; poznamo pa tudi nevarnejše oblike, pri katerih lahko (poleg že omenjenih) prihaja še do hipoksije, tahi- kardije, aritmij, motenj v koagulaciji, cito- penije, jetrne toksičnosti, ledvične odpovedi in (v najbolj izraženih oblikah) do sindro- ma večorganske odpovedi  (55, 57). Dolga leta ni bilo vzpostavljenega enotnega siste- ma za ocenjevanje stopnje CRS, zato so leta 2019 Lee in sod. z Ameriško zvezo za tran- splantacijo  in celično  terapijo  (American Society  for  Transplantation  and  Cellular Therapy, ASCTC) dosegli soglasje, s katerim so natančneje opredelili in poenotili vred- notenje  CRS.  Skladno  s  stopnjo  CRS  so opredelili tudi ustrezne podporne ukrepe. Pri blažjih oblikah sta potrebni predvsem hidracija in znižanje telesne temperature, sledi  pričetek  imunosupresivnega  zdra- vljenja  (zaviralci  IL-6,  kortikosteroidi), z nastopom hipoksije in hipotenzije pa je potrebno še dodajanje kisika in vazopresi- nov, v izrazitejših oblikah pa je potrebno tudi sprejetje  na  oddelek  za  intenzivno  nego (56, 58). Sindrom z imunskimi efektorskimi celicami posredovane nevrotoksičnosti Tudi  ICANS se pojavi v prvem tednu ali prvem  mesecu  po  začetku  zdravljenja s CAR-T. Največkrat se pojavi skupaj s CRS, redkeje pa se lahko pojavi tudi neodvisno. Vzrok ICANS je slabše raziskan kot vzrok CRS, najverjetneje pa gre za prekomerne 395Med Razgl. 2023; 62 (3): mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 395 vnetne procese v osrednjem živčnem siste- mu. V zgodnjih oblikah se kaže s splošno zmedenostjo,  pomanjkanjem  pozornosti, ekspresivno afazijo in težavami s pisanjem (tremor), v napredovalih oblikah pa lahko sledijo nezavest, koma, epileptični napadi, hujše  težave  z  motoriko  in  možganski edem, ki je lahko smrten. Podporni ukrepi so večinoma simptomatski in vključujejo zdravljenje  z  imunosupresivi  (zaviralci IL-6, kortikosteroidi), zdravljenje z antie- pileptiki, spremljanje bolnikov z elektroen- cefalografijo in sprejetje na oddelek za inten- zivno nego (50, 55, 56, 59). Citopenije in hipogamaglobulinemija Citopenije se pojavijo pri približno tretjini bolnikov,  zdravljenih  s  CAR-T. V  zgodnji (akutni) fazi (v prvem mesecu po začetku zdravljenju)  se  najpogosteje  pojavi  nev- tropenija,  sledita  še  trombocitopenija  in anemija. V pozni fazi (po prvem mesecu ali kasneje) v približno enakem razmerju opa- žamo tako nevtropenijo kot trombocitope- nijo,  medtem  ko  je  anemij  manj  (60). Zgodnje citopenije pripisujemo predvsem vrsti limfodeplecijske kemoterapije, CRS in vrstam  predhodnih  kemoterapij  ali  pa obsežnemu  predhodnemu  zdravljenju z obsevanjem. Vzrok poznih oz. vztrajajo- čih citopenij (več kot mesec po začetku zdra- vljenja) ni dobro pojasnjen. Povezujemo jih predvsem s hujšimi stopnjami CRS v zgod- nji  fazi  zdravljenja,  predhodnimi  redi sistemskega zdravljenja in predhodno HSCT. Najverjetneje gre za zaradi vnetnih odzivov okrnjeno  krvotvorno  funkcijo  kostnega mozga, ki se po zdravljenju (in fazi zgod- njih citopenij) ne povrne na bazalni fizio- loški nivo. Če krvotvorna funkcija ni bila popolna  že  pred  pričetkom  zdravljenja s CAR-T, je tveganje za razvoj citopenij še večje (61, 62). Podporno zdravljenje anemij in trombocitopenij temelji na nadomešča- nju eritrocitov in trombocitov, za zdravlje- nje  nevtropenije  pa  najpogosteje  upora- bljamo  stimulirajoč  faktor  granulocitnih kolonij (angl. granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF) (55, 56, 61, 62).  Pomanjkanje limfocitov B je pri zdra- vljenju  bolnikov  z  B-celičnimi  limfomi z anti-CD19 CAR-T pričakovano, saj CD19 izražajo tudi zdravi, nespremenjeni limfo- citi  B.  Hipogamaglobulinemijo,  ki  sledi, zdravimo z nadomeščanjem protiteles (54). ODPORNOST Na ZDRavLJENJE S CaR-T Odpornost na zdravljenje s CAR-T je lahko posledica okrnjene klonske ekspanzije CAR-T, okrnjene  ali  prekomerne  aktivacije  CAR-T, pojava t. i. antigenskega pobega (angl. anti- gen escape)  in  pogostih  mutacij  rakavih celic. Z izjemo klonske ekspanzije večino omenjenih preprek rešujemo pri sami izde- lavi CAR, torej pred samim vnosom terapije. Pristopi  k  doseganju  optimalne  klonske ekspanzije  CAR-T  vključujejo  dodajanje spodbujajočih citokinov (IL-6, IL-7, IL-15) in vitro in uporabo  zaviralcev Brutonove tirozinske kinaze in vivo (ta fiziološko zavira klonsko ekspanzijo limfocitov T). Aktivacija CAR-T je nujna za opravljanje njihove efek- torske funkcije (uničevanja tarčnih celic), medtem  ko  lahko  prekomerna  aktivacija vodi do disfunkcije CAR-T in apoptoze. Zato je  za  doseg  najboljše  aktivacije  ob  stiku s  tarčnim  antigenom  ključno  prirejanje različnih znotrajceličnih signalnih domen pri izdelavi CAR (stimulatorne in kostimu- latorne podenote, glej podpoglavje Struktura himernih antigenskih receptorjev). Antigenski pobeg  je pojav, pri katerem rakave celice zaradi mutacij zmanjšajo izražanje antige- na, ki smo ga izbrali kot tarčo pri izdelavi CAR. V ta namen se razvijajo CAR-T, ki bi bili usmerjeni proti več antigenom hkrati, s čimer bi zmanjšali možnost pojava anti- genskega pobega. Poleg omenjene mutaci- je pa se lahko rakave celice tudi z drugimi spremembami  prilagodijo  na  zdravljenje in postanejo nanj odporne (npr. zmanjšajo izražanje proapoptotskih molekul) (63). 396 Alen Hadžić, Lučka Boltežar Terapija z limfociti T, gensko spremenjenimi s himernimi antigenskimi … mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 396 ZaKLJUČKI Zdravljenje s CAR-T kaže dobre rezultate pri zdravljenju hematoloških rakov že zadnjih deset  let.  Dobre  dolgoročne  rezultate  je pokazalo več raziskav pri bolnikih z B-ALL, visokomalignim B-celičnim limfomom in plazmacitomom. V Sloveniji v času pisanja s CAR-T zdravimo populacijo pediatričnih bolnikov in mladih odraslih s ponovitvami ali neodzivno obliko B-ALL in odrasle bol- nike  s  ponovitvami  ali  neodzivno obliko difuznega velikoceličnega B-celičnega lim- foma,  indikacije  za  zdravljenje  pa  se  po svetu hitro širijo. Glavne prepreke pri upo- rabi CAR-T predstavljajo predvsem pomanj- kanje  jasnih napovednih označevalcev za odgovor na zdravljenje, razvoj odpornosti na zdravljenje in visoka cena samega zdra- vljenja.  Nekatere  države  so  zato  začele s  proizvodnjo  lastnih  produktov  CAR-T, med katere bo zelo verjetno kmalu sodila tudi  Slovenija.  Težavo  lahko  predstavlja tudi dolg čas do izdelave produkta CAR-T, saj lahko od odvzema bolnikovih limfoci- tov  do  aplikacije  izdelanih  CAR-T  mine tudi pet tednov ali več, kar pa je za bolni- ke z agresivnimi hematološkimi maligno- mi izredno dolga čakalna doba. V uporabo prihajajo drugi produkti s podobno učin- kovitostjo (npr. bispecifična protitelesa), ki pa bodo bolniku dostopni takoj. Prihodnost zdravljenja s CAR-T so torej ozke indikaci- je za skrbno izbrane bolnike ob ustreznem času. 397Med Razgl. 2023; 62 (3): mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 397 LITERaTURa 1. Hanahan D, Weinberg RA. Hallmarks of cancer: The next generation. Cell. 2011; 144 (5): 646–674. 2. Mellman I, Coukos G, Dranoff G. Cancer immunotherapy comes of age. Nature. 2011; 480 (7378): 480–89. 3. Taylor BC, Balko JM. Mechanisms of MHC-I downregulation and role in immunotherapy response. Front Immunol. 2022; 13: 844866. 4. Rajčević U. Adoptive cell therapy and chimeric antigen receptor – T cells. Zdravniski Vestnik. 2020; 89 (7–8): 398–407. 5. Sadelain M, Brentjens R, Rivière I. The basic principles of chimeric antigen receptor design. Cancer Discov. 2013; 3 (4): 388–98. 6. June CH, Sadelain M. Chimeric Antigen Receptor Therapy. N Engl J Med. 2018; 379 (1): 64. 7. Sterner RC, Sterner RM. CAR-T cell therapy: Current limitations and potential strategies. Blood Cancer J. 2021; 11 (4): 1–11. 8. Guedan S, Calderon H, Posey AD, et al. Engineering and design of chimeric antigen receptors. Mol Ther Methods Clin Dev. 2019; 12: 145–156. 9. Hudecek M, Sommermeyer D, Kosasih PL, et al. The nonsignaling extracellular spacer domain of chimeric antigen receptors is decisive for in vivo antitumor activity. Cancer Immunol Res. 2015; 3 (2): 125–135. 10. Alabanza L, Pegues M, Geldres C, et al. Function of novel anti-CD19 chimeric antigen receptors with human variable regions is affected by hinge and transmembrane domains. Mol Ther. 2017; 25 (11): 2452–65. 11. Malissen B, Schmitt-Verhulst AM. Transmembrane signalling through the T-cell-receptor-CD3 complex. Curr Opin Immunol. 1993; 5 (3): 324–33. 12. Bridgeman JS, Ladell K, Sheard VE, et al. CD3-based chimeric antigen receptors mediate T cell activation via cis- and trans-signalling mechanisms: implications for optimization of receptor structure for adoptive cell therapy. Clin Exp Immunol. 2014; 175 (2): 258–67. 13. Abate-Daga D, Davila ML. CAR models: Next-generation CAR modifications for enhanced T-cell function. Mol Ther Oncolytics. 2016; 3: 16014. 14. Alnefaie A, Albogami S, Asiri Y, et al. Chimeric antigen receptor T-cells: An overview of concepts, applications, limitations, and proposed solutions. Front Bioeng Biotechnol. 2022; 10: 797440. 15. Larson RC, Maus M V. Recent advances and discoveries in the mechanisms and functions of CAR T cells. Nat Rev Cancer. 2021; 21 (3): 145–61. 16. Levine BL. Performance-enhancing drugs: Design and production of redirected chimeric antigen receptor (CAR) T cells. Cancer Gene Ther. 2015; 22 (2): 79–84. 17. Zhang C, Liu J, Zhong JF, et al. Engineering CAR-T cells. Biomark Res. 2017; 5 (1): 1–6. 18. Cappell KM, Kochenderfer JN. Long-term outcomes following CAR T cell therapy: What we know so far. Nat Rev Clin Oncol. 2023; 20 (6): 359–71. 19. Patel U, Abernathy J, Savani BN, et al. CAR T cell therapy in solid tumors: A review of current clinical trials. EJHaem. 2022; 3 (Suppl 1): 24–31. 20. Jezeršek Novaković B, Boltežar L, Gašljevič G, et al. Reccomendations for diagnosis and treatment of patients with malignant lymphoma. Onkologija : A Medical-Scientific Journal. 2022; 26 (1): 34–75. 21. Brown PA, Shah B, Advani A, et al. Acute Lymphoblastic Leukemia, Version 2.2021, NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology. Journal of the National Comprehensive Cancer Network. 2021; 19(9) : 1079–1109. 22. Centralna baza zdravil. n.d. http://www.cbz.si. 23. Maude SL, Laetsch TW, Buechner J, et al. Tisagenlecleucel in children and young adults with B-cell lymphoblastic leukemia. N Engl J Med. 2018; 378 (5): 439–48. 24. Park JH, Rivière I, Gonen M, et al. Long-term follow-up of CD19 CAR therapy in acute lymphoblastic leukemia. N Engl J Med. 2018; 378 (5): 449–59. 25. Brentjens RJ, Rivière I, Park JH, et al. Safety and persistence of adoptively transferred autologous CD19-targeted T cells in patients with relapsed or chemotherapy refractory B-cell leukemias. Blood. 2011; 118 (18): 4817–28. 26. Frey N V, Shaw PA, Hexner EO, et al. Optimizing chimeric antigen receptor T-cell therapy for adults with acute lymphoblastic leukemia. J Clin Oncol. 2020; 38 (5): 415–22. 27. Qayed M, Bleakley M, Shah NN. Role of chimeric antigen receptor T-cell therapy: Bridge to transplantation or stand-alone therapy in pediatric acute lymphoblastic leukemia. Curr Opin Hematol. 2021; 28 (6): 373–79. 398 Alen Hadžić, Lučka Boltežar Terapija z limfociti T, gensko spremenjenimi s himernimi antigenskimi … mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 398 28. Hu L, Charwudzi A, Li Q, et al. Anti-CD19 CAR-T cell therapy bridge to HSCT decreases the relapse rate and improves the long-term survival of R/R B-ALL patients: AA systematic review and meta-analysis. Ann Hematol. 2021; 100 (4): 1003–12. 29. Gu J, Liu S, Cui W, et al. Identification of the predictive models for the treatment response of refractory/relapsed B-cell ALL patients receiving CAR-T therapy. Front Immunol. 2022; 13: 858590. 30. Shah NN, Lee DW, Yates B, et al. Long-term follow-up of CD19-CAR T-cell therapy in children and young adults with B-ALL. J Clin Oncol. 2021; 39 (15): 1650–59. 31. Laetsch TW, Maude SL, Rives S, et al. Three-year update of tisagenlecleucel in pediatric and young adult patients with relapsed/refractory acute lymphoblastic leukemia in the ELIANA trial. J Clin Oncol. 2023; 41 (9): 1664–9. 32. Jacoby E, Bielorai B, Hutt D, et al. Parameters of long-term response with CD28 -based CD19 chimaeric antigen receptor-modified T cells in children and young adults with B-acute lymphoblastic leukaemia. Br J Haematol. 2022; 197 (4): 475–81. 33. Tasian SK, Silverman LB, Whitlock JA, et al. Temsirolimus combined with cyclophosphamide and etoposide for pediatric patients with relapsed/refractory acute lymphoblastic leukemia: a Therapeutic Advances in Childhood Leukemia Consortium trial (TACL 2014-001). Haematologica. 2022; 107 (10): 2295–303. 34. Hay KA, Gauthier J, Hirayama A V, et al. Factors associated with durable EFS in adult B-cell ALL patients achieving MRD-negative CR after CD19 CAR T-cell therapy. Blood. 2019; 133 (15): 1652–63. 35. Shah BD, Bishop MR, Oluwole OO, et al. KTE-X19 anti-CD19 CAR T-cell therapy in adult relapsed/refractory acute lymphoblastic leukemia: ZUMA-3 phase 1 results. Blood. 2021; 138 (1): 11–22. 36. Roddie C, Dias J, O’Reilly MA, et al. Durable responses and low toxicity after fast off-rate CD19 chimeric antigen receptor-T therapy in adults with relapsed or refractory B-cell acute lymphoblastic leukemia. J Clin Oncol. 2021; 39 (30): 3352–63. 37. Shah BD, Ghobadi A, Oluwole OO, et al. KTE-X19 for relapsed or refractory adult B-cell acute lymphoblastic leukaemia: phase 2 results of the single-arm, open-label, multicentre ZUMA-3 study. The Lancet. 2021; 398 (10299): 491–502. 38. Wang S, Wang X, Ye C, et al. Humanized CD19-targeted chimeric antigen receptor T (CAR-T) cells for relapsed/ refractory pediatric acute lymphoblastic leukemia. Am J Hematol. 2021; 96 (5): E162–5. 39. Alaggio R, Amador C, Anagnostopoulos I, et al. The 5th edition of the World Health Organization classification of haematolymphoid tumours: Lymphoid neoplasms. Leukemia. 2022; 36 (7): 1720–48. 40. Chong EA, Ruella M, Schuster SJ. Five-year outcomes for refractory B-cell lymphomas with CAR T-cell therapy. N Engl J Med. 2021; 384 (7): 673–4. 41. Jacobson C, Locke FL, Ghobadi A, et al. Long-term (≥4 year and ≥5 year) overall survival (OS) by 12- and 24-month event-free survival (EFS): An updated analysis of ZUMA-1, the pivotal study of axicabtagene ciloleucel (Axi-Cel) in patients (Pts) with refractory large B-cell lymphoma (LBCL). Blood. 2021; 138 (Supp 1): 1764. 42. Cappell KM, Sherry RM, Yang JC, et al. Long-term follow-up of anti-CD19 chimeric antigen receptor T-cell therapy. J Clin Oncol. 2020; 38 (32): 3805–15. 43. Schuster SJ, Tam CS, Borchmann P, et al. Long-term clinical outcomes of tisagenlecleucel in patients with relapsed or refractory aggressive B-cell lymphomas (JULIET): A multicentre, open-label, single-arm, phase 2 study. Lancet Oncol. 2021; 22 (10): 1403–15. 44. Hirayama A V, Gauthier J, Hay KA, et al. High rate of durable complete remission in follicular lymphoma after CD19 CAR-T cell immunotherapy. Blood. 2019; 134 (7): 636–40. 45. Wang M, Munoz J, Goy A, et al. Three-year follow-up of KTE-X19 in patients with relapsed/refractory mantle cell lymphoma, including high-risk subgroups, in the ZUMA-2 Study. J Clin Oncol. 2023; 41 (3): 555–67. 46. Abramson JS, Palomba ML, Gordon LI, et al. Two-year follow-up of transcend NHL 001, a multicenter phase 1 study of lisocabtagene maraleucel (liso-cel) in relapsed or refractory (R/R) large B-cell lymphomas (LBCL). Blood. 2021; 138 (Suppl 1): 2840. 47. Locke FL, Miklos DB, Jacobson CA, et al. Axicabtagene ciloleucel as second-line therapy for large B-cell lymphoma. N Engl J Med. 2022; 386 (7): 640–654. 48. Raje N, Berdeja J, Lin Y, et al. Anti-BCMA CAR T-Cell therapy bb2121 in relapsed or refractory multiple myeloma. N Engl J Med. 2019; 380 (18): 1726–37. 49. D’Aloia MM, Zizzari IG, Sacchetti B, et al. CAR-T cells: The long and winding road to solid tumors. Cell Death Dis. 2018; 9 (3): 282. 50. Bachmann M. The UniCAR system: A modular CAR T cell approach to improve the safety of CAR T cells. Immunol Lett. 2019; 211: 13–22. 399Med Razgl. 2023; 62 (3): mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 399 51. Mehrabadi AZ, Ranjbar R, Farzanehpour M, et al. Therapeutic potential of CAR T cell in malignancies: A scoping review. Biomed Pharmacother. 2022; 146: 112512. 52. Munn DH, Bronte V. Immune suppressive mechanisms in the tumor microenvironment. Curr Opin Immunol. 2016; 39: 1–6. 53. Wrzesinski C, Paulos CM, Kaiser A, et al. Increased intensity lymphodepletion enhances tumor treatment efficacy of adoptively transferred tumor-specific T cells. J Immunother. 2010; 33 (1): 1–7. 54. Patel U, Abernathy J, Savani BN, et al. CAR T cell therapy in solid tumors: A review of current clinical trials. EJHaem. 2022; 3 (Suppl 1): 24–31. 55. Gill S, Brudno JN. CAR T-cell therapy in hematologic malignancies: Clinical role, toxicity, and unanswered questions. Am Soc Clin Oncol Educ Book. 2021; (41): e246–5. 56. Schubert ML, Schmitt M, Wang L, et al. Side-effect management of chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy. Ann Oncol. 2021; 32 (1): 34–48. 57. Shimabukuro-Vornhagen A, Gödel P, Subklewe M, et al. Cytokine release syndrome. J Immunother Cancer. 2018; 6 (1): 56. 58. Lee DW, Santomasso BD, Locke FL, et al. ASTCT consensus grading for cytokine release syndrome and neurologic toxicity associated with immune effector cells. Biol Blood Marrow Transplant. 2019; 25 (4): 625–38. 59. Sterner RC, Sterner RM. Immune effector cell associated neurotoxicity syndrome in chimeric antigen recep- tor-T cell therapy. Front Immunol. 2022; 13: 879608. 60. Jain T, Olson TS, Locke FL. How I treat cytopenias after CAR T-cell therapy. Blood. 2023; 141 (20): 2460–9. 61. Sharma N, Reagan PM, Liesveld JL. Cytopenia after CAR-T cell therapy—A brief review of a complex problem. Cancers (Basel). 2022; 14 (6): 1501. 62. Si X, Gu T, Liu L, et al. Hematologic cytopenia post CAR T cell therapy: Etiology, potential mechanisms and perspective. Cancer Lett. 2022; 550: 215920. 63. Berger TR, Maus M V. Mechanisms of response and resistance to CAR T cell therapies. Curr Opin Immunol. 2021; 69: 56–64. Prispelo 13. 7. 2023 400 Alen Hadžić, Lučka Boltežar Terapija z limfociti T, gensko spremenjenimi s himernimi antigenskimi … mr23_3_Mr10_2.qxd 26.9.2023 9:26 Page 400