Izbira primernih monoklonskih protiteles in optimizacija imunohistokemijske metode za dokazovanje patološkega prionskega proteina v možganih bolnikov s sporadično obliko Creutzfeldt-Jakobove bolezni
Selection of suitable monoclonal antibodies and optimization of the immunohistochemical method for the detection of pathological prion protein in the brains patients with sporadic Creutzfeldt-Jakob disease

slovenski

2002

letnik 41, številka 1

Creutzfeld-Jakobov sindrom   Prioni    Protitelesa monoklonska   Imunohistokemija   prionske bolezni    Creutzfeldt-Jakobova bolezen    analiza 

Društvo Medicinski razgledi
(Obvezni izvod spletne publikacije)

Diagnostika prionskih bolezni temelji na imunohistokemijskem določanju ob uporabi protiteles proti prionskemu proteinu (PrP), ki ne razlikujejo med celično obliko PrP (PrPc) in patološko izoobliko (PrPsc). Zato zahteva ta metoda močne predobdelave za odstranjevanje PrPc in razkrivanje epitopa na PrPsc v parafinskih rezinah umrlih za prionsko boleznijo. Namen naše naloge jebil testirati monoklonska protitelesa proti PrPsc (MPt) V5B2, K4B3, A4/5 in E5/9, ki so jih pripravili na Zavodu RS za transfuzijo krvi, jih primerjati s kontrolnimi, komercialno dostopnimi MPt 3F4 in 6H4, ter poiskati enostavnejšo predobdelavo za razkrivanje epitopa na PrPsc. Parafinske histološke rezine vzorcev možgan štirih umrlih za sporadično Creutzfeldt-Jakobovo boleznijo (sCJB) in dveh umrlih primerljive starosti, ki nista imela CJB, smo obdelali sprilagojeno standardno imunohistokemijsko metodo avidin-biotin kompleks (ABC)ob uporabi naših MPt, kontrolnih MPt in štirih predobdelav. Imunohistokemijsko reakcijo (IHR) z našimi MPt in PrPsc smo primerjali z IHR med kontrolnima MPt (3F4 in 6H4) in PrPsc z ozirom na jakost signala IHR in število pozitivnih reakcij. Ista MPt smo uporabili tudi na zaledenelih rezinahvzorcev dveh ne-CJB-možgan brez kakršnekoli predobdelave. V nalogi smo pokazali, da so vsa štiri testirana MPt specifična za Prsc, saj za razliko od dveh kontrolnih MPt niso prikazala PrPc v zaledenelih rezinah svežih ne-CJB-možgan. Prav tako smo pokazali, da se z močnejšimi predobdelavami histoloških rezin IHR izboljša, tako v jakosti kot tudi v številu pozitivnih reakcij (p < 0,05). Naše MPt V5B2 je občutljivejše od kontrolnega MPt 3F4 (p =0,03) in je zmožno z manj intenzivno predobdelavo zanesljivo označiti PrPsc vmožganih obolelih za CJB. (Izvleček skrajšan pri 2000 znakih)

26.06.2015